Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
wh1 and wh2 - ширина пиков на половине высоты.
При необходимости может быть измерена высота седловины (Hv) между двумя частично разделёнными пиками в стандартном образце, а также высота меньшего пика (Hp) и рассчитана величина коэффициента разделения неполностью разделённых пиков:
p = Hp
v Hv
ФАКТОР СИММЕТРИИ
Фактор симметрии пика (As) рассчитывается из выражения:
A = W0,05
A s -
s 2d
wo.os - ширина пика на одной двадцатой высоты,
d - расстояние между перпендикуляром, опущенным из максимума пика и передним краем пика на одной двадцатой высоты.
Испытания на повторяемость площадей (стандартное отклонение площадей или отношений площадь/время миграции) и времен миграции (стандартное отклонение времени миграции) используются в качестве параметров пригодности. Повторяемость времени миграции обеспечивает испытание методики промывки капилляра. Альтернативным способом предупреждения ухудшения повторяемости времени миграции является использование отношения времени миграции относительно внутреннего стандарта.
Для определения родственных соединений может быть полезно испытание на подтверждение отношения сигнал/шум для стандартного образца (или определение предела количественного определения).
ОТНОШЕНИЕ СИГНАЛ/ШУМ
Пределы обнаружения и количественного определения отвечают отношению сигнал/шум, соответственно, 3 и 10. Отношение сигнал/шум (S/N) рассчитывается из выражения:
А = 2H
N ~ h ’
где:
H - высота пика, соответствующая рассматриваемому компоненту, на электрофореграмме, полученной при использовании рекомендованного раствора сравнения. Высота пика измерена от максимума пика до экстраполированной базовой линии для сигнала, величина которого эквивалентна двадцатикратному превышению ширины пика на половине высоты,
h - размах для фонового шума (уровень шума) на электрофореграмме, полученной при введении контрольной пробы. Величина эквивалентна двадцатикратному превышению ширины пика на половине высоты для пика на электрофореграмме, полученной при использовании рекомендованного раствора сравнения и, если возможно, расположенного на одном и том же расстоянии от места возможного обнаружения пика.
2.2.48. РАМАНОВСКАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ (# СПЕКТРОМЕТРИЯ КОМБИНАЦИОННОГО РАССЕЯНИЯ)
Рамановская спектрометрия (неупругое рассеяние света) - это процесс рассеяния света, при котором исследуемый образец облучается интенсивным монохроматическим светом (обычно излучение лазера) и для света, рассеиваемого образцом, определяется сдвиг частоты.
Рамановская спектрометрия является дополнительным методом по отношению к ИК-спектрометрии, в том смысле, что оба этих метода основаны на молекулярных колебаниях частиц исследуемого вещества. Однако рамановская и ИК-спектрометрия отличаются по относительной чувствительности для различных функциональных групп. Рамановская спектрометрия особенно чувствительна к неполярным связям (например, одинарные или кратные связи C-C), тогда как вода, для которой характерно сильное поглощение в ИК-области, обладает слабым рамановским рассеянием и поэтому хорошо подходит на роль растворителя в рамановской спектрометрии.
Прибор. Спектрометры для получения рамановских спектров обычно состоят из следующих компонентов:
- источник монохроматического света, чаще всего лазер с длиной волны в ультрафиолетовой, видимой или ближней инфракрасной области,
- подходящая оптика (линзы, зеркала, световоды), которые направляют возбуждающее излучение на образец и собирают свет, рассеиваемый образцом,
- оптическое устройство (монохроматор или фильтр), которое пропускает сдвинутое по частоте рамановское рассеяние и препятствует попаданию на детектор интенсивного света, частота которого равна частоте возбуждающего света (рэлеевское рассеяние),
- диспергирующее устройство (дифракционная решётка или призма), соединённое со щелью, регулирующей длину волны, и детектором (обычно фотоумножитель),
или:
- диспергирующее устройство (дифракционная решётка или призма), соединённое с многоканальным детектором (обычно прибор с зарядовой связью (ПЗС, CCD)),
или:
- интерферометр, регистрирующий интенсивность рассеянного света во времени, и устройство обработки данных, которое с помощью фурье-преобразования преобразует данные в диапазон частот или волновых чисел.
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦА
Рамановские спектры могут быть получены для твёрдых веществ, жидкостей и газов, причём как напрямую, так и помещенных в стеклянные контейнеры или трубки, как правило, без предварительной подготовки образца или растворения.
Основным ограничением рамановской спектрометрии является флуоресценция примесей, которая мешает детектору улавливать значительно более слабый рамановский сигнал. Флуоресценции можно избежать при использовании в качестве возбуждающего света лазерного излучения с большой длиной волны, например, находящейся в ближней инфракрасной области. Интенсивность некоторых рамановских линий может быть усилена несколькими способами, например, путём использования резонансной рамановской спектрометрии (RR) или усиленной поверхностью рамановской спектрометрии (SERS).
